Q1
什么是脂類？
脂類是脂肪和類脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）的統(tǒng)稱，它是構(gòu)成人體組織的正常成分，不溶于水而易溶于酒精等脂溶劑中。脂類與蛋白質(zhì)、碳水化合物是人體的三大營養(yǎng)素，其主要功能是儲(chǔ)能和供能。
脂滴（Lipid Droplet）是中性脂（主要為甘油三酯和酯化膽固醇）的主要貯存場所，是脂肪細(xì)胞的主要成分。正常情況下，除脂肪細(xì)胞以外，常規(guī)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)不見或僅能看到微量脂滴。
Q2
為什么要進(jìn)行脂類染色？
1
在病理情況下，心、肝、腎等實(shí)質(zhì)器官容易發(fā)生脂肪異常堆積，胞質(zhì)出現(xiàn)脂滴或者脂滴明顯增多以及形成斑塊等現(xiàn)象。因此，通過脂類染色能將這些脂滴清晰的顯現(xiàn)出來，為病理診斷提供圖像參考。
2
研究脂肪生成過程，即干細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞的機(jī)制，對(duì)于了解糖尿病、肥胖癥、心血管疾病、肝病和癌癥等疾病的發(fā)病機(jī)制和尋找潛在治療方法至關(guān)重要。通過脂類染色可以更直觀地確認(rèn)脂質(zhì)累積和細(xì)胞分化情況。
Q3
常用的脂類染色方法有哪些？
目前常用于脂類染色的有經(jīng)典蘇丹染色、油紅O染色以及尼羅紅熒光染色。脂類染色常規(guī)適用樣本包含速凍、冰凍的動(dòng)植物切片以及成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞。
經(jīng)典蘇丹染料包括蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ和蘇丹黑B，是常用的經(jīng)典脂質(zhì)染料，可顯示動(dòng)物組織的脂質(zhì)積累和植物組織的木栓化，也可用于掩蓋組織脂褐素的自發(fā)熒光。
油紅O屬于新一代蘇丹脂質(zhì)染料，其著色較經(jīng)典染色法更深，特異性也更好。在觀察動(dòng)脈粥樣硬化斑塊以及肝臟和肌肉脂質(zhì)積累方面具有很好的效用。G1263型改良油紅O染色試劑盒（環(huán)保型）在經(jīng)典異丙醇法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了優(yōu)化更新，解決了染色液易揮發(fā)、染料易沉淀的關(guān)鍵難題，極大的降低了染色難度。
尼羅紅能與脂類物質(zhì)結(jié)合并發(fā)出熒光，在530 nm波長激發(fā)下，顯示強(qiáng)烈桔紅色熒光。染色過程中基本不含有機(jī)試劑，對(duì)微小脂滴的定位和顯示效果較好。可用于組織切片和培養(yǎng)細(xì)胞的脂類染色，對(duì)脂滴進(jìn)行原位標(biāo)記，并可搭配DAPI進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。
Q4
非常規(guī)的脂類染色方法有哪些？
1
特殊石蠟切片染色法：由于脂肪易溶于有機(jī)溶劑，所以不能直接乙醇脫水包埋制成石蠟切片進(jìn)行染色。若是非要制成石蠟切片，需要將初步固定后的組織先浸泡不飽和脂肪酸置換進(jìn)脂滴，然后置于重金屬酸溶液中固定處理，重金屬酸經(jīng)不飽和脂肪酸的還原作用形成黑色的重金屬——脂質(zhì)復(fù)合物，不會(huì)被二甲苯、乙醇等有機(jī)溶劑所溶解，對(duì)很微小的脂肪滴都能清晰顯示。之后再進(jìn)行脫水、透明等程序包埋成蠟塊，切片后經(jīng)脫蠟、透明可直接中性樹膠封片，切片能夠長期保存。但整個(gè)過程所需試劑繁雜，整體操作時(shí)間較長，且重金屬酸屬于有毒有害物質(zhì)，所以一般不建議使用本染色方法。
2
制成碳蠟切片染色法：除了經(jīng)典的冰凍切片染色方法外，還可以將組織制成碳蠟切片。碳蠟切片不同于石蠟切片，在組織固定水洗后，不需使用乙醇、二甲苯脫水透明可直接浸蠟包埋，且切片方法與常規(guī)石蠟切片相同，在一定程度上可以減少脂質(zhì)的流失，缺點(diǎn)就是碳蠟吸濕性強(qiáng)，需避光干燥保存。
Q5
樣本如何固定以及染色后如何封片？
固定：樣本可不固定直接切片染色，如需固定則不能使用高濃度小分子醇、酮類的固定液固定，如丙酮和甲醇、乙醇會(huì)將脂滴從切片上洗脫從而不利于脂質(zhì)染色，建議使用甲醛類水性固定液，甲醛固定對(duì)組織形態(tài)保存效果更佳。
產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
G2161 | 中性福爾馬林 固定液(10%) | 500mL/5L |
G2147 | 中性福爾馬林鈣 固定液 | 500mL |
P1110 | 4％組織細(xì)胞 固定液 | 100mL/500mL/ 10*500mL |
封片：對(duì)于組織切片和細(xì)胞爬片，可以使用S2150甘油明膠、抗熒光衰減封片劑等水性封片劑封片，封片后及時(shí)拍照留存；對(duì)于培養(yǎng)板細(xì)胞，建議染色、清洗后不要晾干，使用1×PBS或ddH2O覆蓋細(xì)胞表面，保持細(xì)胞濕潤，然后在鏡下觀察拍照，晾干會(huì)導(dǎo)致鏡下脂滴發(fā)黑影響觀察。
產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
S2150 | 甘油明膠封片劑 | 10mL |
S2155 | 水性封片劑 （PVP） | 10mL/100mL |
S2130 | 抗熒光衰減封片劑 （PVP） | 25mL |
Q6
如何對(duì)脂質(zhì)染色結(jié)果進(jìn)行分析？
細(xì)胞：細(xì)胞經(jīng)染色和洗滌之后，可以使用純的丙酮或異丙醇等脂溶性溶劑提取出脂質(zhì)結(jié)合染料，然后轉(zhuǎn)移至檢測板中在510-520nm測定吸光度。吸光度與樣品的脂質(zhì)含量成正比，并可間接用于評(píng)估脂肪生成。
組織：可以使用圖像分析軟件，對(duì)脂滴著色面積進(jìn)行識(shí)別計(jì)算，除以總面積從而獲得脂滴含量。
有獎(jiǎng)問答
脂質(zhì)染色的最佳溫度是多少？
A. 2-8℃ | ||
B.10-20℃ | ||
C. 30-40℃ | ||
D. 60-80℃ |
歡迎大家在評(píng)論區(qū)發(fā)送答案和分享脂肪化造模和脂質(zhì)染色的相關(guān)經(jīng)驗(yàn)，我們會(huì)選取最先回答正確的兩位和獲得點(diǎn)贊最多兩位同學(xué)送出抗熒光衰減封片劑（PVP）（型號(hào)：S2130）一瓶，組織切片、細(xì)胞爬片、孔板中培養(yǎng)細(xì)胞都可使用哦。
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
G1260 | 飽和油紅O染色液 | 100mL/500mL |
G1262 | 油紅O染色試劑盒 （細(xì)胞專用） | 4×20mL/ 4×50mL |
G1265 | 糊精水溶液(1%) | 100mL |
O8291 | 油酸 | 500mL |
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