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瓊脂糖凝膠CL-2B

貨號(hào)：S8731

規(guī)格：10ml/100ml

一、瓊脂糖凝膠CL-2B簡(jiǎn)介

瓊脂糖凝膠CL-2B是在瓊脂糖凝膠2B的基礎(chǔ)上通過(guò)交聯(lián)使微球的剛性增強(qiáng)，理化性能提高，有利用于工業(yè)生產(chǎn)。該介質(zhì)用于生物大分子的凝膠層析。

本品呈白色球狀凝膠，無(wú)嗅、無(wú)味、無(wú)肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)。

二、親和填料特性

*檢測(cè)條件： 層析柱10mm×300mm  *柱床高15cm，25℃，流動(dòng)相為0.1mol/LNaCl。

三、 適用范圍

本產(chǎn)品具有很高的化學(xué)穩(wěn)定性、高流速、較好的機(jī)械性能、可多次重復(fù)使用等特點(diǎn)，非特異性吸附低，回收率高，可用有機(jī)溶劑及1~2mol/L 的NaOH在位清洗，適用于工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的凝膠色譜純化。

四、注意事項(xiàng)

產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~25℃（保存溶液為20% 乙醇），通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。

用過(guò)的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。

本產(chǎn)品避免與氧化劑接觸；避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中。

保質(zhì)期：5年。

五、操作步驟：

1、裝柱

凝膠過(guò)濾介質(zhì)的使用對(duì)裝柱的要求較高，為了保證分離效果，一般通過(guò)柱子上加一個(gè)裝柱器來(lái)使分離柱裝滿凝膠，或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進(jìn)行檢驗(yàn)。

以下過(guò)程為通用介質(zhì)裝填過(guò)程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子，可在柱床穩(wěn)定后將柱床壓緊，接好管路。

（1）讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。

   （2）選擇一根一定直徑的柱子，長(zhǎng)約30~60cm,根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠（約為柱床體積的1.15倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。

（3）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端無(wú)氣泡。

（4）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

（5）打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定。用緩沖液平衡柱子，到柱床穩(wěn)定。

（6）推薦用一個(gè)裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平，上好柱頭。

2、平衡

讓緩沖液以一定流速流過(guò)柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。

3、上樣

（1）樣品用緩沖液配制，渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。含鹽量過(guò)大、濃度過(guò)小的樣品要先做處理，再上樣。

（2）介質(zhì)對(duì)樣品組分的分離是按組分分子量大小進(jìn)行的，分子量大的先流出來(lái)。

（3）上樣體積約為柱體積的1~2%，越小分離越好。

4、洗脫

用緩沖液洗脫，洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。

5、再生

一般用緩沖液洗到平衡，可再次使用。

6、在位清洗

（1）對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

（2）對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可用1M NaOH 去除。

（3）對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

清洗完畢后，用少3倍緩沖液平衡柱子。

7、注意

在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。

8、去熱源

用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時(shí)或用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí)。或用以下方法步驟去除：

（1）2倍柱體積的70%乙醇；

（2）2倍柱體積50mM Tris-HCl pH7.5；

（3）1倍柱體積4M尿素；

（4）3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl；

以上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制。

9、 消毒

用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。