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過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：BC0090

規(guī)格：50管/48樣

產(chǎn)品簡介：

POD廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。

試驗中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體×2瓶，4℃保存；用時每瓶加入5mL試劑一，現(xiàn)配現(xiàn)用；

試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存。

操作步驟：

一、粗酶液提取：   

1、細菌、細胞或組織樣品的制備   

收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1ml提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率200w，超聲3秒，間隔10秒。重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。

稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

二、POD測定操作表 

測定前將試劑一、二和三 37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）放置10min。在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑，加入樣本后立即混勻并計時，記錄470nm下30s時的吸光值A(chǔ)1和1min30s后的吸光值A(chǔ)2。計算ΔA=A2-A1

注意：如果ΔA小于0.005，可將反應(yīng)時間延長到5min。如果ΔA大于0.5，可將樣本提取液稀釋后測定，計算公式中乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)

POD活性計算：   

1、血清（漿）POD活力的計算:

單位的定義：每mL血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘使A470變化0.01定義為一個酶活力單位。

POD（U/L）＝反應(yīng)總體積（1070ul）÷樣本體積（15ul）÷0.01×ΔA=7133×ΔA

2、組織POD活力計算：

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘使A470變化0.01定義為一個酶活力單位。

POD（U/mg prot）＝反應(yīng)總體積（1070ul）÷樣本體積（15ul）÷0.01×ΔA÷樣本蛋白濃度(mg/ml)=7133×ΔA÷樣本蛋白濃度(mg/ml)

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘使A470變化0.01定義為一個酶活力單位。

POD（U/g mass）＝反應(yīng)總體積（1070ul）÷樣本體積（15ul）÷0.01×ΔA÷樣本質(zhì)量=7133×ΔA÷樣本質(zhì)量

3、按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細菌或細胞在反應(yīng)體系中每分鐘使A470變化0.01定義為一個酶活力單位。

POD（U/10⁴ cell）＝反應(yīng)總體積（1070ul）÷樣本體積（15ul）÷0.01×ΔA÷500（10⁴ cell /mL）=14.27×ΔA