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                產(chǎn)品名稱:果膠酶活性檢測試劑盒

                產(chǎn)品型號:BC2630

                產(chǎn)品報價:

                產(chǎn)品特點:果膠酶活性檢測試劑盒
                果膠酶水解果膠生成半乳糖醛酸,半乳糖醛酸與 DNS 試劑反應(yīng)生成在 540nm 有特征吸收峰的棕紅色物質(zhì),測定 540nm 處吸光值變化可計算得果膠酶活性。

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                BC2630果膠酶活性檢測試劑盒的詳細(xì)資料:

                果膠酶活性檢測試劑盒

                果膠酶活性檢測試劑盒說明書
                可見分光光度法
                英文名稱:Pectinase activity assay kit
                關(guān)鍵詞:果膠酶|果膠酶活性檢測|果膠酶活性測定|果膠酶活性
                注意:正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

                貨號:BC2630
                規(guī)格:50T/24S

                產(chǎn)品內(nèi)容:
                提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。
                試劑一:液體 40mL×1 瓶,4℃保存。若溶液中有不溶解物質(zhì),可以 50℃水浴溶解。
                試劑二:液體 40mL×1 瓶,4℃避光保存。
                標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1 支,10mg 半乳糖醛酸,4℃保存。臨用前加入 0.943mL 蒸餾水,配成 50µmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。

                產(chǎn)品說明:
                果膠酶(pectinase)是分解果膠的酶類,包括原果膠酶,果膠酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類,廣泛存在于高等植物果實和微生物中,是水果加工中重要的酶。
                果膠酶水解果膠生成半乳糖醛酸,半乳糖醛酸與 DNS 試劑反應(yīng)生成在 540nm 有特征吸收峰的棕紅色物質(zhì),測定 540nm 處吸光值變化可計算得果膠酶活性。

                試驗中所需的儀器和試劑:
                可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、1mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

                操作步驟:
                一、粗酶液提取:
                組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入1mL 提取液)進行冰浴勻漿,然后 10000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。
                菌類:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min);然后 10000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。
                液體:直接檢測。

                二、測定步驟:
                1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長 540nm,蒸餾水調(diào)零。
                2、將 50µmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為 6、5、4、3、2、1 µmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
                3、取 125µL 樣本沸水浴 10min 備用。
                4、操作表:(在 1.5mL 離心管中)
                對照管 測定管 標(biāo)準(zhǔn)管 空白管
                試劑一(µL)    500    500    500   500
                50℃水浴溫育 5min
                標(biāo)準(zhǔn)溶液(µL)   -      -       125    -
                樣本(µL)       -     125       -     -
                蒸餾水(µL)     -      -        -    125
                煮沸樣本(µL)  125     -        -     -
                混勻,50℃水浴反應(yīng) 30min,馬上沸水浴 5min,冷卻后 8000g,常溫離心 10min,取上清。
                上清液(µL) 500 500 500 500
                試劑二(µL) 500 500 500 500
                沸水浴 5min,冰浴冷卻終止反應(yīng),測定 540nm 處吸光值 A,計算△A=A 測定管-A 對照管,
                △A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。每個測定管需設(shè)一個對照管。
                三、果膠酶活性計算
                1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:
                以各個標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為 x 軸,其對應(yīng)的△A 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b,
                將△A 帶入方程得到 x(µmol/mL)
                2、 果膠酶活性的計算:
                (1)按蛋白濃度計算
                酶活定義:在 50℃,pH3.5 條件下,每毫克蛋白每小時分解果膠產(chǎn)生 1µmol 半乳糖醛酸為 1 個
                酶活力單位。
                果膠酶活性(U/mg prot)=x×V 提取÷(V 提取×Cpr)÷T= 2x÷Cpr。
                (2)按樣本質(zhì)量計算
                酶活定義:在 50℃,pH3.5 條件下,每克樣品每小時分解果膠產(chǎn)生 1µmol 半乳糖醛酸為 1 個酶
                活力單位。
                果膠酶活(U/g 鮮重)= x×V 提取÷W÷T=2x÷W。
                (3)按照細(xì)胞數(shù)量計算
                酶活定義:在 50℃,pH3.5 條件下,每 104 個細(xì)胞每小時分解果膠產(chǎn)生 1µmol 半乳糖醛酸為 1
                個酶活力單位。
                果膠酶活(U/104
                cell)= x×V 提取÷T÷細(xì)胞數(shù)量(萬個)=2x÷細(xì)胞數(shù)量(萬個)。
                (4)按液體體積計算
                酶活定義:在 50℃,pH3.5 條件下,每 mL 樣本每小時分解果膠產(chǎn)生 1µmol 半乳糖醛酸為 1 個
                酶活力單位。
                果膠酶活(U/mL)= x×V 樣÷V 樣÷T= 2x。
                V 提取:提取液體積,1mL; V 樣:加入的樣品體積,0.125mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;
                W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間:0.5h。
                注意事項:
                1、 A 大于 1.5 時,建議將樣品用提取液稀釋后再進行測定。
                2、 植物果實組織建議將樣本稀釋 10 倍或 20 倍后再測定。

                相關(guān)文獻:
                《Transcription factor VmSeb1 is required for the growth, development, and virulence in Valsa mali》 作者:Yuxing Wu,Liangsheng Xu,Zhiyuan Yin,Hao Feng,Lili Huang 期刊:Microbial Pathogenesis 影響因子:2.332 PMID:29959044
                《Two members of the velvet family, VmVeA and VmVelB, affect conidiation, virulence and pectinase expression in Valsa mali》 作者:Yuxing Wu , Liangsheng Xu , Zhiyuan Yin , Qingqing Dai , Xiaoning Gao,  Hao Feng , Ralf T. Voegele , Lili Huang 期刊:Molecular Plant Pathology 影響因子:4.379 PMID:29127722
                 

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