羥脯氨酸(HYP)含量檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品名稱(chēng): 羥脯氨酸(HYP)含量檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品英文名: Hydroxyproline(HYP) Content Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC0250             產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣          產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：420
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
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簡(jiǎn)要介紹：
HYP是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一，膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等，因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)。
    樣品經(jīng)水解產(chǎn)生游離的HYP，進(jìn)一補(bǔ)被氯胺T氧化，氧化產(chǎn)物與對(duì)二甲氨基ben甲醛反應(yīng)，產(chǎn)生紅色化合物，在560nm處有特征吸收峰。通過(guò)測(cè)定樣品水解液560nm吸光值，可計(jì)算HYP含量。

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：6mol/L鹽酸，自備。濃鹽酸：H₂O（V/V）= 1:1，室溫保存。
試劑一：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。
    標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，0.5mg/mL 羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)品，4℃保存。
產(chǎn)品說(shuō)明：
HYP是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一，膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等，因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)。
樣品經(jīng)酸水解產(chǎn)生游離的HYP，進(jìn)一步被氯胺T氧化，氧化產(chǎn)物與對(duì)二甲氨基ben甲醛反應(yīng)，產(chǎn)生紅色化合物，在560nm處有特征吸收峰。通過(guò)測(cè)定樣品水解液560nm吸光值，可計(jì)算HYP含量。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
天平、烘箱、玻璃管、離心機(jī)、水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、6mol/L鹽酸和蒸餾水。
操作步驟：
一、羥脯氨酸提取
1. 組織：稱(chēng)取約0.5g樣品于玻璃管，將組織盡量剪碎以便消化，蓋子稍松不密閉。加入5mL的提取液，煮沸或110℃烘箱26小時(shí)消化沒(méi)有可見(jiàn)大的團(tuán)塊，16000rpm，25℃，離心20min（若離心后仍有雜質(zhì)，可通過(guò)過(guò)濾去除），用10mol/LNaOH（約3mL）調(diào)節(jié)pH值6～8范圍內(nèi)。蒸餾水定容8mL，取上清待測(cè)。（過(guò)程中可能有黑色物質(zhì)生成，若長(zhǎng)時(shí)間不能消化，可能為碳化的物質(zhì)）
2. 細(xì)胞：取500萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，加入1mL的提取液，煮沸或110℃烘箱26小時(shí)消化透明狀，16000rpm，25℃，離心20min，用10mol/LNaOH（約0.5mL）調(diào)節(jié)pH值6～8范圍內(nèi)。蒸餾水定容2mL，取上清待測(cè)。
二、測(cè)定操作：

1. 將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為15、7.5、3.75、1.875、0.938、0.469、0.234、0.117ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
2. 按下表進(jìn)行操作：

三、羥脯氨酸含量計(jì)算公式

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸，?A標(biāo)準(zhǔn)（?A =A標(biāo)準(zhǔn)管-A對(duì)照管）為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程y=kx+b。將?A測(cè)定（?A =A測(cè)定管-A對(duì)照管）帶入方程得到x。

1. 羥脯氨酸含量的測(cè)定：

（1）按樣本鮮重計(jì)算：
組織羥脯氨酸含量（µg/g 鮮重）= x×V樣品÷（W×V樣品÷V組提）=8x÷W。
（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
組織羥脯氨酸含量（µg/mg prot）= x×V樣品÷（Cpr×V樣品）=x÷Cpr。
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
細(xì)胞羥脯氨酸含量（µg/10⁴ cell）= x×V樣品÷（細(xì)胞數(shù)量×V樣品÷V胞提）=2x÷細(xì)胞數(shù)量。
V樣品：加入的樣品體積，0.2mL；V組提：組織提取液體積，8mL；V胞提：細(xì)胞提取液體積，2mL；W：樣本鮮重；細(xì)胞數(shù)量：以10⁴計(jì)；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。
注意事項(xiàng)：

1. OD值大于1，樣品適當(dāng)稀釋再測(cè)定，注意計(jì)算公式里乘以稀釋倍數(shù)。
2. 試劑有一定的毒性，請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施，防止吸入或與皮膚接觸。

     3、按樣本蛋白濃度計(jì)算時(shí)，需單獨(dú)提取樣本中的蛋白質(zhì)并測(cè)定。

 相關(guān)文獻(xiàn)：

《Enhancement of the chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells and cartilage repair by ghrelin》 作者:Litong Fan  Jiaqing Chen  Yanmeng Tao  Boon Chin Heng  Jiakuo Yu  Zheng Yang  Zigang Ge 期刊:Wiley Online Library 影響因子: PMID:30644571