硝酸還原酶(NR)活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品英文名:  Micro Nitrate Reductase（NR）Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC0085       產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣          產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：580
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字:  硝酸還原酶檢測(cè)試劑盒|NR檢測(cè)試劑盒|硝酸還原酶|試劑盒

簡(jiǎn)要介紹：
NR廣泛存在于植物中，是植物硝態(tài)氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮的關(guān)鍵酶，也是誘導(dǎo)酶，對(duì)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)有影響。
    NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，NO3ˉ+NADH+H＋→NO2ˉ+NAD＋+H2O ；產(chǎn)生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下，與對(duì)氨基ben磺酸及α-萘胺定量生成紅色偶氮化合物；生成的紅色偶氮化合物在540 nm有大吸收峰，可用分光光度法測(cè)定。

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
誘導(dǎo)劑儲(chǔ)備液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體10mL×1瓶，-20℃保存。
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存。臨用前加入2mL提取液溶解，可分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
試劑三：液體2mL×1瓶，4℃保存。
試劑四：粉劑×1瓶，-20℃保存。臨用前加入5mL蒸餾水溶解，可分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
試劑五：液體8mL×1瓶，4℃保存。（如出現(xiàn)結(jié)晶析出，60 ℃水浴溶解后使用）
試劑六：液體8mL×1瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：NaNO₂標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1mL，10μmol/mL，-20℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋0.2μmol/mL。
誘導(dǎo)劑應(yīng)用液的配制：用時(shí)將誘導(dǎo)劑儲(chǔ)備液用水稀釋10倍，即取10mL誘導(dǎo)劑儲(chǔ)備液加90mL蒸餾水，充分混勻。
產(chǎn)品說(shuō)明：
NR（ EC 1.7.1.3）廣泛存在于植物中，是植物硝態(tài)氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮的關(guān)鍵酶，也是誘導(dǎo)酶，對(duì)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)有影響。
NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，NO₃ˉ+NADH+H^＋→ NO₂ˉ +NAD^＋+H₂O；產(chǎn)生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下，與對(duì)–氨基ben磺酸α-萘胺定量生成紅色偶氮化合物；生成的紅色偶氮化合物在540 nm有大吸收峰，可用分光光度法測(cè)定。
需自備的儀器和用品:
      可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品測(cè)定的前處理
1、取適量誘導(dǎo)劑于燒杯中，將新鮮標(biāo)本洗凈，濾紙吸干，放入誘導(dǎo)劑應(yīng)用液中（淹沒(méi)即可），浸泡2h，取出樣本，濾紙吸干后，-20℃冷凍30min，取出樣本，濾紙吸干。（根據(jù)需要進(jìn)行誘導(dǎo)處理）
2、稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液，冰浴研磨，4000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
二、測(cè)定步驟
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)540nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定（在EP管中加入下列試劑）

 混勻，顯色20min，520nm下比色，分別記為A測(cè)定、A對(duì)照、A標(biāo)準(zhǔn)、A空白。計(jì)算ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白
    注意：空白管只需測(cè)一次。
三、NR活性計(jì)算：
（1）按樣本鮮重計(jì)算：
單位定義：每小時(shí)每g鮮重樣品中催化產(chǎn)生 1μmol NO₂ˉ的量為一個(gè) NR活力單位。
NR（U/g 鮮重）=ΔA÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V提取÷W÷T =0.4×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W。
（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位定義：每小時(shí)每mg組織蛋白催化產(chǎn)生 1μmol NO₂ˉ的量為一個(gè) NR活力單位。
NR（U/mg prot）==ΔA÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V樣品÷（V樣品×Cpr）÷T=0.4×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr。
V樣品：吸取樣本體積，0.05mL；V提取：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)液濃度，0.2μmol/mL。
注意事項(xiàng)：
1、當(dāng)測(cè)定的吸光值大于1.2或者ΔA大于0.8時(shí)，建議將上清液稀釋后測(cè)定。
2、ΔA測(cè)定過(guò)小（小于0.01），可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（水浴時(shí)間）。

相關(guān)文獻(xiàn)：
《FIP1 Plays an Important Role in Nitrate Signaling and Regulates CIPK8 and CIPK23 Expression in Arabidopsis》 作者:Chao Wang, Wenjing Zhang, Zehui Li, Zhen Li, Yingjun Bi, Nigel M. Crawford and Yong Wang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.716 PMID:
《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30558146
《The trehalose-6-phosphate synthase TPS5 negatively regulates ABA signaling in Arabidopsis thaliana》 作者:Lianfu Tian,Zijing Xie,Changqing Lu,Xiaohua Hao,Sha Wu,Yuan Huang,Dongping Li,Liangbi Chen 期刊:Plant Cell Rep. 影響因子:3.499 PMID:30963238

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